高一生物必修1實(shí)驗(yàn)計(jì)劃.多杰才旦

高一生物必修1實(shí)驗(yàn)計(jì)劃

--觀察植物細(xì)胞的有絲分裂

生物科學(xué)是一門實(shí)驗(yàn)科學(xué)，實(shí)驗(yàn)在生物教學(xué)中有十分重要的地位。隨高考的不斷改革，高考對(duì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)有了更高的要求。由于研究問(wèn)題性質(zhì)的不同，科學(xué)研究的方法也有差異。為切實(shí)搞好實(shí)驗(yàn)教學(xué)，提高課堂教學(xué)效果，在此根據(jù)我校實(shí)際情況制定《觀察植物細(xì)胞的有絲分裂》實(shí)驗(yàn)計(jì)劃如下：

一、教學(xué)目的

1.觀察植物細(xì)胞有絲分裂的過(guò)程,識(shí)別有絲分裂的不同時(shí)期。

2.初步掌握制作洋蔥根尖有絲分裂裝片的技術(shù)。

3.初步掌握繪制生物圖的方法。

二、教學(xué)計(jì)劃

1.實(shí)驗(yàn)前教師應(yīng)講解實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。

(1)解離充分是實(shí)驗(yàn)成功的必備條件。解離充分,組織才能分散,細(xì)胞也不會(huì)重疊。

(2)染色時(shí),染液的濃度和染色時(shí)間必須掌握好。特別是染色不能過(guò)深,否則鏡下一片紫色,無(wú)法觀察。

(3)壓片時(shí)用力必須恰當(dāng),過(guò)重時(shí)會(huì)將組織壓爛,過(guò)輕則細(xì)胞未分散,二者都將影響觀察。

2.制作裝片過(guò)程中空隙時(shí)間的利用。解離、漂洗、染色三個(gè)步驟中,都有一個(gè)等待時(shí)間的問(wèn)題,教師應(yīng)充分利用這些空隙時(shí)間。建議講解以下內(nèi)容:洋蔥根尖的培養(yǎng)方法；取材時(shí)間；解離過(guò)程中氯化氫的作用；漂洗的目的及方法；分生區(qū)細(xì)胞與根尖其他區(qū)細(xì)胞的區(qū)別；高倍鏡的使用方法等。

3.教給學(xué)生觀察要領(lǐng)。讓學(xué)生觀察時(shí),先用低倍鏡觀察,再用高倍鏡觀察。裝片壓得好的,根尖各個(gè)區(qū)清楚的,要找分生區(qū),在該區(qū)范圍內(nèi)進(jìn)行觀察;裝片壓得根尖分區(qū)不清楚的,則找分生區(qū)的細(xì)胞觀察。

4.增加演示實(shí)驗(yàn)。學(xué)生自己制作的裝片,由于某種原因,觀察效果不一定理想,教師應(yīng)在實(shí)驗(yàn)課前準(zhǔn)備五臺(tái)示范鏡,分別演示有絲分裂固定裝片的間期、前期、中期、后期、末期五個(gè)不同時(shí)期,并在旁邊畫出示意圖。凡是自己制作的裝片觀察效果不好的學(xué)生,都可以觀察講臺(tái)前的示范鏡。

三、備課資料

洋蔥根尖的培養(yǎng)

1.培養(yǎng)洋蔥生根時(shí),避免用新采收的洋蔥,因它尚在休眠不易生根。培養(yǎng)過(guò)程中,注意每天至少換水一次,以防爛根。如果必須用當(dāng)年剛采收的新洋蔥培養(yǎng)生根,則應(yīng)設(shè)法打破它的休眠。常用的方法是用低濃度的赤霉素溶液浸泡洋蔥底盤,這樣可以促使其生根。

2.對(duì)于頭年收下的洋蔥,可以采用如下方法促使它生根。

(1)選擇底盤大的洋蔥作生根材料。

(2)剝?nèi)ネ鈱永掀?用刀削去老根(從底盤中央向四周削),注意不要削掉四周的“根芽。

(3)用燒杯裝滿清水,放上洋蔥,放置在光照處。水要保持清潔,注意每天換水1～2次。一般2～3d即可獲得實(shí)驗(yàn)所需材料。如果班級(jí)較多,為了防止后用的班級(jí)所需的洋蔥根長(zhǎng)得過(guò)長(zhǎng),也可以放入冰箱里(1～2℃)培養(yǎng)。

3.固定時(shí)間取材。洋蔥根尖細(xì)胞有絲分裂的時(shí)間是有規(guī)律的。通常在每天上午10時(shí)至下午2時(shí)分裂活躍,尤其以上午11時(shí)30分時(shí)最活躍,可在這時(shí)取材。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1.解離時(shí),也可將剪取的2～3mm洋蔥根尖浸入濃鹽酸和酒精的體積分?jǐn)?shù)為95%的溶液各半的混合液中,浸20～30min。這樣,根尖細(xì)胞被殺死細(xì)胞間質(zhì)被溶解,細(xì)胞容易分離。

2.染色時(shí),也可用紫藥水取代龍膽紫染液,但濃度不宜過(guò)大。可將紫藥水稀釋,即每2～3滴水中加入一滴紫藥水。將洋蔥根尖染色3～5min后再移入中央有一滴清水的載玻片上,制作裝片。

3.壓片時(shí),僅靠用手指輕按,不易將根尖細(xì)胞分散開(kāi)�？蓪⑷旧�后的洋蔥根尖用小刀壓平,或用鉛筆帶橡皮的一端稍用力壓,這樣才能使細(xì)胞分散,并且便于放平蓋玻片。

一、根據(jù)課標(biāo)要求，必做實(shí)驗(yàn)如下編號(hào)實(shí)驗(yàn)/探究/模型建構(gòu)的名課實(shí)驗(yàn)主要準(zhǔn)備材料稱時(shí)《使用高倍鏡觀察幾種細(xì)胞》1酵母菌、水綿、葉、魚(yú)的紅細(xì)胞教師預(yù)備實(shí)驗(yàn)1染色液模型建《嘗試制作真核細(xì)胞的三構(gòu)維結(jié)構(gòu)模型》實(shí)驗(yàn)9《觀察根尖分生組織細(xì)胞11三維動(dòng)畫軟件泡沫安裝三維動(dòng)塑料等畫軟件洋蔥、龍膽紫洋蔥根尖培的有絲分裂》探究4《環(huán)境因素對(duì)光合作用強(qiáng)度的影響》1根據(jù)需要而定養(yǎng)二、根據(jù)“活動(dòng)建議”要求，學(xué)校有條件能開(kāi)設(shè)的實(shí)驗(yàn)：編號(hào)實(shí)驗(yàn)/探究/模型建構(gòu)的名課實(shí)驗(yàn)主要準(zhǔn)備材料稱時(shí)《檢測(cè)生物組織中的還原糖、脂肪和蛋白質(zhì)》《觀察DNA和RNA在細(xì)胞中的分布》《探究植物細(xì)胞的吸水和失水》《使用高倍鏡觀察葉綠體和線粒體》《探究影響酶活性的條件》《探究酵母菌細(xì)胞呼吸的方式》《綠葉中色素的提取和分離》《細(xì)胞大小與物質(zhì)運(yùn)輸?shù)年P(guān)系》教師預(yù)備實(shí)驗(yàn)21梨、花生米、豆?jié){等浸泡花生米實(shí)驗(yàn)31甲基綠、吡羅紅溫水探究11按學(xué)生要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)51菠菜葉健那綠染液探究21淀粉和淀粉酶、肝臟指導(dǎo)探究32重鉻酸鉀、食用酵母演示實(shí)驗(yàn)裝等置菠菜、無(wú)水乙醇、層析液干燥濾紙實(shí)驗(yàn)71實(shí)驗(yàn)81瓊脂塊NaOH溶液制備瓊脂塊三、課標(biāo)未作要求，根據(jù)學(xué)生需要，學(xué)校有條件能開(kāi)設(shè)的實(shí)驗(yàn)編號(hào)實(shí)驗(yàn)/探究/模型建構(gòu)的名課實(shí)驗(yàn)主要準(zhǔn)備材料稱時(shí)《體驗(yàn)制備細(xì)胞膜的方法》1羊血教師預(yù)備實(shí)驗(yàn)4稀釋血液實(shí)驗(yàn)6《比較過(guò)氧化氫在不同條件下的分解》1過(guò)氧化氫液、肝臟研磨肝臟四、學(xué)生學(xué)習(xí)中出現(xiàn)的一些需要借助實(shí)驗(yàn)進(jìn)行探究的問(wèn)題，教師幫助分析，并協(xié)助學(xué)生分析完成實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。注意：

1、對(duì)學(xué)生評(píng)價(jià)指標(biāo)

實(shí)驗(yàn)操作技能、操作規(guī)范、結(jié)果的準(zhǔn)確度、合作和交流能力、提出問(wèn)題能力2、對(duì)教師的要求

（1）、做好實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作。①準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需的實(shí)驗(yàn)儀器和實(shí)驗(yàn)材料。②盡量做到每個(gè)實(shí)驗(yàn)前都能自己預(yù)做，確保實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。

（2）、要求學(xué)生認(rèn)真完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(cè)，認(rèn)真分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，及時(shí)總結(jié)經(jīng)驗(yàn)和教訓(xùn)，存在問(wèn)題，及時(shí)改進(jìn)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后及時(shí)對(duì)學(xué)生進(jìn)行有效的評(píng)價(jià)。

（3）、加強(qiáng)對(duì)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)室紀(jì)律、安全、衛(wèi)生方面的教育，確保學(xué)生的身心健康。

擴(kuò)展閱讀：沙 棘 葉 中 多 糖 的 初 步 研 究.多杰才旦

沙棘葉中多糖的初步研究

分類：畢業(yè)論文201*06

摘要本實(shí)驗(yàn)首次探討了沙棘葉中多糖的提取分離，測(cè)定其多糖的百分含量。

首先用蒸餾水清洗干葉，以洗掉塵土、浮渣，去掉粗梗，剪細(xì)。適量石油醚反復(fù)脫脂，濾渣自然揮干，再用常溫水浸泡一次，80℃熱水浸泡兩次，以提取水溶性物質(zhì)，然后合并所有水提液，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在適宜條件（t＝50℃，抽真空0.09Mpa）下濃縮溶液至適宜體積，sevage法反復(fù)操作去蛋白，最后用95％的乙醇使溶液達(dá)到不同的濃度而沉淀出多糖，優(yōu)選出沉淀沙棘多糖的最優(yōu)醇濃度。0－5℃冰箱中放置48小時(shí)后，過(guò)濾時(shí)用無(wú)水乙醇，丙酮洗數(shù)次，真空抽干。

粗產(chǎn)品重新溶解于適量水中，然后通過(guò)大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，蒸餾水洗脫，洗脫液在PH值為8時(shí)，用20％的H2O2，50℃以下保溫2h脫色，以保證產(chǎn)品的顏色，最后用95％的乙醇使溶液醇濃度達(dá)到80％以析出多糖，重復(fù)上面的析糖操作，最后保存產(chǎn)品于干燥處。

用D（＋）葡萄糖作標(biāo)準(zhǔn)，苯酚－硫酸法制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出線性回歸方程，從而得到粗多糖的含量，由此也可以算出沙棘葉中多糖的百分含量。然后進(jìn)行TLC法初步定性確定多糖成分，再進(jìn)行核磁共振定性分析，即可檢驗(yàn)其準(zhǔn)確成分。

關(guān)鍵詞沙棘；多糖；提�。幻摰鞍�；AB－8大孔樹(shù)脂

AbstractTheexperimentisthefirsttoresearchtheHippohae

rhamnoidesLleaves’polysaccharides.ThepoposeoftheexperimentistakingthepolysaccharidesfromtheHippohaerhamnoidesLleaves.Firstwashtheleavesthroughthewatertocleanthedirtaway,thenusepetroleumethertodegreasetheleavesmanytimes,extractthewater-solublematerialthroughhotwaterof80℃,utilizingtherevolval-evaporationunderthecondition(t=50℃,vacuum0.09Mpa)toconcentratetheaquatotheproperphysicalvolume.Isolationandcompositionofpolysaccharidesfromtheaqua,alcoholprecipitatebyhotwaterextractionandremoveproteinfrompolysaccharidesby"sevag",inordertogetoptimumalcoholconcentrationfromprecipitatingHippohaerhamnoidesLpolysaccharides.

AndalsotrypolysaccharidespurifiedbyAB-8MacfofeticulafResintoachievegoodresults.Finallysumuptheoptimumtechnologyofextractionandpurificationpolysaccharidesfromtheleaves.thenlyingintherefrigerator(0-5℃)twodays,fitratedbyalcohol,acetone,morethanthreetimes.

Dissolveintotheproperwateragain;throughAB－8MacfofeticulafResin,watercleanse;addthesodiumhydroxidetomakethewater’sPH8,usethehydrogenperoxide(20%),below50℃preservation2hourstoensurethecoloroftheproducts.;thenalcoholprecipitatingagain.

WiththeD(+)-theglucoseasthestandardtofigureoutthestandardcurveinthewayof“phenol-sulfuricacid”,thusobtainingthecontainmentofthecudepolysaccharides.

Thismethodwillincreasetheproductionofpolysaccharides,andtheuseofAB－8MacfofeticulafResinwillenhancethepurityoftheproductsandreducethecost.

KeywordsHippohaerhamnoidesL;Polysaccharides;Extraction;

Removalfrompolysaccharides；AB－8MacfofeticulafResin.

1前言

沙棘（HippohaerhamnoidesL.），胡頹子科植物，分布于歐亞大陸的溫帶、寒溫帶及亞熱帶三區(qū)。我國(guó)的東北、華北、西北和西南等地區(qū)是沙棘屬植物的主要分布區(qū)。由于沙棘屬植物具有極強(qiáng)的生態(tài)適應(yīng)性并富含多種營(yíng)養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)，已引起各國(guó)工作者的廣泛重視。

沙棘是一種富含生物活性物質(zhì)的天然植物，目前已發(fā)現(xiàn)的生化成分達(dá)190多種。我國(guó)是最早利用沙棘的國(guó)家，在成書(shū)公元八世紀(jì)的藏醫(yī)學(xué)典籍《四部醫(yī)典》中就詳細(xì)地記載了它的藥性。但是最早對(duì)沙棘進(jìn)行系統(tǒng)科學(xué)研究的是前蘇聯(lián)學(xué)者，我國(guó)對(duì)沙棘的研究始于1985年，并將沙棘列為國(guó)家科技攻關(guān)項(xiàng)目加以重點(diǎn)研究，如今已有專刊——《沙棘》（由國(guó)家水利部主辦）。在前蘇聯(lián)，科學(xué)家開(kāi)發(fā)利用沙棘由食用轉(zhuǎn)向以生化研究為基礎(chǔ)的醫(yī)用研究，并將沙棘果油和沙棘汁及

[1]其制品運(yùn)用于宇航食品，作為特殊的“日餐必需添加劑”。而在沙棘的開(kāi)發(fā)中，

黃酮類化合物一直是國(guó)內(nèi)外學(xué)者較為關(guān)注的一類物質(zhì)。PeterC.H.Hollman等人就黃酮類物質(zhì)的分析及其重要作用寫了一篇綜述[2]。前蘇聯(lián)學(xué)者發(fā)現(xiàn)沙棘黃酮具有扼制動(dòng)脈粥樣硬化，降低血液中膽固醇等作用。國(guó)內(nèi)王家良王秉文等對(duì)沙棘的研究較多，其研究表明：沙棘黃酮能顯著增加心臟的收縮和舒張功能有明顯的抗心肌缺血作用及抗心律失常作用[3－4]。沙棘有很好的生態(tài)作用。是我國(guó)“三北”防護(hù)林的主要樹(shù)種之一，對(duì)于保持和改善那些地區(qū)的水土保持和生態(tài)環(huán)境起了重要作用[5]。

沙棘葉又是優(yōu)良的飼料或飼料添加劑，沙棘具有更高的蛋白質(zhì)和脂肪含量以及更好的適口性[6]，毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，沙棘葉和沙棘殘?jiān)�均具無(wú)毒物質(zhì)。沙棘的嫩葉還可以炒制茶葉、提取SOD用于化妝品等廣泛用途。

綜上所述，沙棘葉中的有效成分豐富，開(kāi)發(fā)沙棘葉大有可為。目前對(duì)于沙棘果汁、果油的開(kāi)發(fā)研究利用已經(jīng)比較成熟，但是其綜合利用技術(shù)不夠成熟，沙棘葉的研究也不是很多，尤其是沙棘葉中多糖的研究，國(guó)內(nèi)外對(duì)此有關(guān)的研究還沒(méi)有見(jiàn)于發(fā)表，其生理活性目前也尚未證實(shí)，但是從相關(guān)報(bào)道來(lái)看，植物多糖主要有以下生物活性[7-14]：

免疫調(diào)節(jié)、抗癌防癌及抗遺傳損傷、抗輻射及促進(jìn)骨髓造血機(jī)能、降血糖、降血脂（枸杞多糖）及抗動(dòng)脈粥樣硬化（如云芝多糖）、抗氧化及抗衰老、保肝以及其他抗凝血、抗胃潰瘍、抗炎、抗微生物、鎮(zhèn)靜、抗驚厥、止喘降血壓作用。

而從沙棘葉的多種功用可以估計(jì)它的多糖也應(yīng)具有多種活性，而且在提取黃酮的工藝中可以同時(shí)充分提取多糖，大大增加沙棘葉的綜合利用價(jià)值，創(chuàng)造高價(jià)值產(chǎn)品，可對(duì)當(dāng)?shù)厝嗣裾业揭粭l可行的脫貧致富途徑。這樣又可調(diào)動(dòng)當(dāng)?shù)剞r(nóng)民的積極性，大力種植沙棘對(duì)加快黃土高原綜合治理，促進(jìn)生態(tài)環(huán)境的改變，防止沙漠化等具有重大的社會(huì)生態(tài)價(jià)值。對(duì)綠化荒漠更是形成良性循環(huán)。因此，本文對(duì)沙棘葉中多糖的探索研究很有必要，具有開(kāi)創(chuàng)性意義。

因此本實(shí)驗(yàn)首次研究沙棘葉中多糖的提取分離，借鑒其他植物多糖成分的提取方法，再考慮沙棘葉的自身特點(diǎn)，改進(jìn)傳統(tǒng)分離多糖的方法，采用AB－8大孔樹(shù)脂分離純化各種多糖，無(wú)污染，效率高，節(jié)省成本，優(yōu)選出沙棘葉多糖提取分離的最優(yōu)工藝。測(cè)定其中粗多糖的百分含量，然后進(jìn)行TLC法初步定性確定多糖成分，再進(jìn)行核磁共振定性分析[15-18]，即可檢驗(yàn)其準(zhǔn)確成分。根據(jù)其具體成分，便可以知道沙棘葉中多糖的理論藥理作用。

2．實(shí)驗(yàn)部分

2.1原料及儀器2.1.1原料

沙棘葉（內(nèi)蒙）；大孔樹(shù)脂（AB-8）；石油醚（60－90℃）；工業(yè)酒精（95％）；濃硫酸(95.5%)；苯酚(AR)；無(wú)水乙醇（AR）；丙酮（AR）；乙醚(AR)；D(+)-葡萄糖(AR)；PH試紙；2.1.2儀器752紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；醫(yī)用離心機(jī)(4000r/min)；新飛電冰箱；SH2-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵；

2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1原料準(zhǔn)備：（1）試劑的準(zhǔn)備

20％的H2O2：166.7ml30％的H2O2稀釋定容到250ml；0.05M的NaOH溶液：2gNaOH于1000ml容量瓶中定容；

苯酚（5％）[19]：30g苯酚加水70ml使之溶解得到30％的苯酚，置于冰箱中避光保存。臨用時(shí)振蕩混勻取4ml稀釋至20ml，即為5％濃度；

樹(shù)脂的預(yù)處理及再生[20]：AB8樹(shù)脂用丙酮浸泡數(shù)天，濕法裝柱，再用丙酮洗至流出液與水混合不產(chǎn)生渾濁，再用大量水洗，水浸泡備用。

0.05M的NaOH溶液洗至無(wú)色，水洗至中性，95％的乙醇洗至無(wú)色，水洗。（2）沙棘葉的預(yù)處理

將干沙棘葉用蒸餾水洗去塵土，時(shí)間要迅速，50℃烘箱中烘干。篩掉較大的梗和粗枝，將葉子輕輕于研缽中壓碎，不要太碎，放于干燥處備用。2.2.2沙棘葉粗多糖的提取（1）脫脂

將100g預(yù)處理過(guò)的沙棘葉浸泡于1200ml石油醚中8小時(shí)，再換一次石油醚，以石油醚浸過(guò)葉子為準(zhǔn)。6小時(shí)后倒出石油醚，自然揮干石油醚。（2）提取

取脫脂過(guò)的葉子40g，分兩份，依次用蒸餾水250ml（常溫）、200ml（80℃）、150ml（80℃）均浸泡1小時(shí)。合并所有浸提液，共1200ml，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至400ml（t＝50℃，抽真空0.09Mpa）。（3）脫蛋白

脫蛋白有多種方法：三氯乙酸法，sevage法，等等，基于試驗(yàn)條件，采用sevage法[21]較為適宜。1/5濃縮液體積的氯仿，1/25濃縮液體積的正丁醇，劇烈振蕩20分鐘，然后攪拌5小時(shí)，分液漏斗靜止分層1小時(shí)，分離掉有機(jī)溶劑和沉淀，再反復(fù)一次，基本可除盡蛋白質(zhì)。（4）醇析

除蛋白后的溶液濃縮至50ml，加入95％的乙醇使其濃度分別達(dá)到50％、60％、70％、80％、85％。放在0－5℃冰箱中48小時(shí)。取出后抽濾，分別用無(wú)水乙醇，丙酮洗數(shù)次，真空抽干,得到粗產(chǎn)品。

2.2.3多糖的純化（1）過(guò)柱

將得到的粗產(chǎn)品重新完全溶解于適量水中，將預(yù)處理過(guò)的AB－8樹(shù)脂濕法裝柱，控制流速3ml/min，用水洗脫，控制流速6ml/min，洗至洗脫液遞加95％的乙醇無(wú)沉淀。（2）脫色

濃縮液體至50ml，加入40ml0.05M的NaOH溶液，調(diào)劑PH值至8，再滴加20％的H2O2，50℃以下保溫2h除盡未反應(yīng)完的H2O2。（3）重析

將脫完色的溶液濃縮至50ml，加入95％的乙醇使其濃度達(dá)到80％，使其沉淀完全，放在0－5℃冰箱中48小時(shí)，取出后抽濾，分別用無(wú)水乙醇，丙酮，乙醚洗三次，真空抽干。得到較純產(chǎn)品。干燥處保存。

2.2.4總多糖含量的測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備[22]及樣品含量的測(cè)定采用用D（＋）葡萄糖作標(biāo)準(zhǔn)，苯酚－硫酸法制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

精密稱取D（＋）葡萄糖0.02g，定容100ml，分別取0，0.4，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6，1.8。稀釋至5ml，加入1.0ml苯酚（5％），搖勻靜止，立即加入5.0ml濃H2SO4,5min后，沸水浴15min，冷水冷卻，紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)于490nm波長(zhǎng)處比色，測(cè)定吸光度，做吸光度A與濃度C（ug/ml）線性回歸方程。

精密稱取樣品0.04g，稀釋定容1000ml，同上法測(cè)定其吸光度。

3結(jié)果與討論

3.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1.1實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)(1)提取數(shù)據(jù)

a.脫脂：曾選用索氏提取法，現(xiàn)與浸泡法比較如下：

表一索氏提取法與浸泡法脫脂的比較

索氏提取法取30g研磨過(guò)的葉片，于虹吸管中加入350ml石油醚，

燒瓶中加入400ml，75oC水浴回流提取5.5h，提取液顏色為黃色；倒出提取液，加入新的石油醚回流提取1h,石油醚顏色不再加深，停止回流。石油醚為淡黃色

浸泡法30g研磨過(guò)的葉片，用石油醚以15：1（體積：重量）的

比例浸泡沙棘葉約24小時(shí)，倒出石油醚再以10：1的比例浸泡20～24小時(shí)，石油醚浸提液黃色變淡即可。

優(yōu)缺點(diǎn)通過(guò)對(duì)脫脂后的沙棘葉以及回收石油醚時(shí)的剩余物進(jìn)行

稱量，發(fā)覺(jué)質(zhì)量相差甚微，幾乎相等；而且對(duì)比石油醚提取液顏色，也相差不大，因而浸泡法操作較索氏提取法更簡(jiǎn)單，所以本試驗(yàn)選取浸泡法對(duì)沙棘葉進(jìn)行脫脂處理。b.醇析:濃縮液中加入95％的乙醇，使溶液達(dá)到不同的醇濃度，其所析出的多糖粗產(chǎn)品如下表：表二濃縮液在不同醇濃度下析出的粗糖產(chǎn)品編號(hào)①②③④⑤沙棘葉（g）2020202020溶液體積（ml）505050505095％醇用量（ml）55.5685.7114.0266.67425.0醇濃度（％）50.060.070.080.085.0產(chǎn)品質(zhì)量（g）0.5430.7950.8050.9911.021產(chǎn)品外觀灰色黑色灰和黑灰白灰白細(xì)小顆粒小顆粒小顆粒細(xì)小粉末小顆粒產(chǎn)率(％)2.7％3.975％4.025％4.952％5.105％(2)含量測(cè)定數(shù)據(jù)：本步驟利用苯酚－硫酸法共測(cè)定了兩組數(shù)據(jù)，所用樣品均為醇沉濃度為80%的第④組產(chǎn)品。所得到的數(shù)據(jù)見(jiàn)下面兩表：3.1.2結(jié)果處理

（1）相關(guān)與直線方程

本實(shí)驗(yàn)采用相關(guān)系數(shù)與直線回歸方程來(lái)檢驗(yàn)所測(cè)定的數(shù)據(jù)，相關(guān)系數(shù)“γ”是測(cè)定變量之間相關(guān)密切程度和相關(guān)方向的代表性指標(biāo)。但是相關(guān)分析不能指出兩變量相互關(guān)系的具體形式，也無(wú)法從一個(gè)變量的變化來(lái)推測(cè)另一個(gè)變量的變化關(guān)系。而回歸方程則是通過(guò)一定的數(shù)學(xué)方程來(lái)反映變量之間相互關(guān)系的具體形式，以便從一個(gè)已知量來(lái)推測(cè)另一個(gè)未知量，為估算預(yù)測(cè)提供一個(gè)重要的方法。

（2）數(shù)據(jù)處理

考慮到有幾組平行數(shù)據(jù)，因此用c語(yǔ)言編程，減少運(yùn)算量，求得線性回歸方程與相關(guān)系數(shù)分別為：第一組：A=0.00734+0.61528C,γ=0.88488

第二組：A=0.009654+0.603429C,γ=0.99909

從結(jié)果中看出第一組數(shù)據(jù)中γ明顯不合要求，故采用第二組數(shù)據(jù)，作出相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖：

圖五不同濃度的D（＋）葡萄糖在490nm波長(zhǎng)下與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

由圖五可見(jiàn)第二組數(shù)據(jù)基本呈線性關(guān)系，則由標(biāo)準(zhǔn)圖可得樣品中多糖的濃度為：11.6ug/ml

那么可以計(jì)算出：a．樣品中總多糖的含量為：樣品多糖濃度÷樣品濃度×100％

即：11.6÷20×100％＝58％

即：（0.991×58％）÷20×100％＝2.84％

3.2討論

3.2.1預(yù)處理：沙棘葉的預(yù)處理很重要，洗掉塵土，便于產(chǎn)品的純化；葉片不

宜過(guò)碎，以防熱提取時(shí)引起糊化。3.2.2提取部分

（1）脫脂：脫脂時(shí)間不宜過(guò)短或過(guò)長(zhǎng)，過(guò)短脂溶性物質(zhì)溶解不完全，

過(guò)長(zhǎng)則浪費(fèi)時(shí)間；浸泡時(shí)宜少量多次，有利于脫脂

（2）提�。禾崛�時(shí)也是宜于先泡后加熱，少量多次水提取。加熱的溫

度不宜過(guò)高，80℃即可，高溫破壞多糖的活性，低溫不利于提取效率。而濃縮時(shí)濃縮為原體積的1/3即可，便于脫蛋白時(shí)節(jié)省試劑。

（3）脫蛋白：a.除蛋白時(shí)宜采用sevage法，但需反復(fù)操作。經(jīng)實(shí)驗(yàn)，

劇烈振蕩20分鐘，然后攪拌5小時(shí)，分液漏斗靜止分層1小時(shí)，兩遍即可。采用三氯乙酸法，雖然效果很好，但是反應(yīng)太劇烈，部分多糖也隨之損耗；b.將提取液取少量與碘反應(yīng)，呈陰性，說(shuō)

明多糖中并無(wú)淀粉或量很少，并不需要加α－淀粉酶去除淀粉。

（4）醇析：用醇沉淀之前應(yīng)該濃縮至50ml，便于節(jié)省醇用量，節(jié)省成

本。經(jīng)實(shí)驗(yàn)對(duì)比可知隨著醇濃度的加大，粗糖產(chǎn)量也隨之增大，但是80％和90％的醇沉濃度多糖產(chǎn)率相差不多，且高濃度時(shí)極有可能沉淀中包含其他大量雜質(zhì)，但是其醇的用量相差很大，從表二中看出用量相差幾乎一倍。因此從經(jīng)濟(jì)角度考慮，采用80％的醇沉濃度即可。

（5）干燥：過(guò)濾采用無(wú)水乙醇，丙酮洗洗數(shù)次，盡量不用乙醚，乙醚

的沸點(diǎn)很低易揮發(fā)往往帶入空氣中的水分。因此，操作要迅速，且用表面皿蓋住，防止吸取空氣中的水分，否則多糖很容易成為膠質(zhì)而變黑變粘，再溶解時(shí)需很長(zhǎng)時(shí)間。真空抽干時(shí)一般不宜采用加熱，因?yàn)槎嗵呛苋菀滋炕��?/p>

3.2.2純化分離部分

根據(jù)不同分子量的多糖在大孔樹(shù)脂中洗脫出來(lái)的先后順序，便可分時(shí)間段收集不同的單一多糖。再依次進(jìn)行濃縮，80％濃度的醇沉淀。先進(jìn)行TLC法初步定性確定多糖成分，再進(jìn)行核磁共振定性分析，即可檢驗(yàn)其準(zhǔn)確成分。

b．沙棘葉中總多糖的含量：（產(chǎn)品質(zhì)量×樣品多糖含量）÷沙棘葉質(zhì)量×100％3.2.3含量測(cè)定：a.5％濃度的苯酚應(yīng)該用時(shí)用30％的苯酚稀釋現(xiàn)配，而30％的苯酚應(yīng)置于冰箱中避光保存，因?yàn)楸椒右籽趸�。b.測(cè)量吸光度時(shí)一定要等到穩(wěn)定后再讀數(shù)，否則偏差很大。c.最后算的多糖含量為2.84％，這個(gè)含量是不低的，很具有開(kāi)發(fā)前景，但是具體是哪幾種多糖，還有待進(jìn)一步檢驗(yàn)。

4實(shí)驗(yàn)總結(jié)

本實(shí)驗(yàn)首次探討了沙棘葉中粗多糖的提取分離，通過(guò)上面實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可以得出沙棘葉多糖提取分離的最優(yōu)工藝是：

其多糖含量的測(cè)定采用用D（＋）葡萄糖作標(biāo)準(zhǔn)，苯酚－硫酸法制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出線性回歸方程及多糖含量。

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，由于時(shí)間不夠多，使得平行實(shí)驗(yàn)做的較少，從而使得數(shù)據(jù)可能有一定的誤差而沒(méi)有進(jìn)行校正。由于“非典”的嚴(yán)重影響，致使后期進(jìn)行TLC法初步定性確定多糖成分，以及進(jìn)行核磁共振定性分析，檢驗(yàn)其準(zhǔn)確成分等工作無(wú)法如期進(jìn)行，只有待后人再做進(jìn)一步的研究。

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