生化實(shí)驗(yàn)心得

生化實(shí)驗(yàn)心得

劉欣怡201*00140057201*級(jí)生物基地班我很喜歡做實(shí)驗(yàn)，并且樂(lè)于鍛煉自己的動(dòng)手能力。

本學(xué)期的生化實(shí)驗(yàn)，雖然只從第二周上到第十五周，但是我收獲了很多并且留下了深刻的印象。對(duì)于本次實(shí)驗(yàn)心得的撰寫(xiě)，我將分為以下3個(gè)部分來(lái)進(jìn)行：本學(xué)期實(shí)驗(yàn)回顧、本學(xué)期實(shí)驗(yàn)總結(jié)以及對(duì)于生化實(shí)驗(yàn)課的支持和建議。一、本學(xué)期實(shí)驗(yàn)回顧：

本學(xué)期的生化實(shí)驗(yàn)課上，我們一共進(jìn)行了11次實(shí)驗(yàn)，分別是Folin-酚試劑法測(cè)定血清蛋白質(zhì)含量、酵母RNA的提取、醋酸纖維薄膜電泳、紫外吸收法測(cè)定RNA含量、聚酰胺薄膜層析、纖維素酶活力的測(cè)定（三硝基水楊酸法）、還原糖和總糖含量的測(cè)定（三硝基水楊酸法）、酶最適PH的測(cè)定、費(fèi)林試劑熱滴定糖、肌糖原酵解作用、微量凱氏定氮法。這些實(shí)驗(yàn)具有代表性，是典型的生化實(shí)驗(yàn)。在這些實(shí)驗(yàn)中，涵蓋了以前無(wú)機(jī)實(shí)驗(yàn)和有機(jī)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)操作，還有全新的實(shí)驗(yàn)操作以及實(shí)驗(yàn)儀器。

在這學(xué)期的生化實(shí)驗(yàn)課上，我既復(fù)習(xí)并熟練了大一無(wú)機(jī)實(shí)驗(yàn)和有機(jī)實(shí)驗(yàn)的基本實(shí)驗(yàn)操作和儀器（比如移液管、滴定管、蒸餾等），又學(xué)習(xí)并掌握了許多新操作以及新儀器的使用，比如紫外分光光度計(jì)、離心機(jī)、聚酰胺薄膜、熱滴定、凱氏定氮儀器等。最重要的是，我學(xué)習(xí)并掌握了一些重要的實(shí)驗(yàn)方法和原理，比如Folin-酚試劑法、紫外吸收法、三硝基水楊酸法、費(fèi)林試劑與糖的反應(yīng)、微量凱氏定氮法等。掌握了這些實(shí)驗(yàn)原理以及方法，有利于我們?cè)谝院笾徐`活運(yùn)用設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。

總體來(lái)說(shuō)，本學(xué)期生化實(shí)驗(yàn)教會(huì)了我測(cè)定蛋白質(zhì)、糖、核酸的方法，電泳和層析分離物質(zhì)、如何測(cè)定酶的相關(guān)特性、驗(yàn)證肌糖原酵解作用、如何提取RNA。二、本學(xué)期實(shí)驗(yàn)總結(jié)

通過(guò)這學(xué)期的生化實(shí)驗(yàn)，我的實(shí)驗(yàn)技能的到了大大地提升，同時(shí)，實(shí)驗(yàn)中的細(xì)節(jié)、注意事項(xiàng)以及老師拓展的知識(shí)令我獲益匪淺，也讓我深深地認(rèn)識(shí)到科學(xué)是非常嚴(yán)謹(jǐn)?shù)�，尤其是在做�?shí)驗(yàn)的時(shí)候，要全神貫注，井井有條，否則很容易出差錯(cuò)，而這個(gè)小小的差錯(cuò)很有可能就使實(shí)驗(yàn)前功盡棄，既耽誤時(shí)間又浪費(fèi)試劑。

回顧這一學(xué)期我的實(shí)驗(yàn)課程，每一次我都能完成實(shí)驗(yàn)任務(wù)。大多數(shù)都比較順利，小組內(nèi)兩人也大多配合默契，但是有一些美中不足的地方。有的一些實(shí)驗(yàn)比較麻煩，實(shí)驗(yàn)步驟較為繁瑣，我們?cè)谧鰧?shí)驗(yàn)時(shí)偶爾會(huì)產(chǎn)生不耐煩的思想，只想著抓緊結(jié)束，但是在這種時(shí)候往往更容易出差錯(cuò)。我有兩次記憶很深，一次是在測(cè)定纖維素酶活力（三硝基水楊酸法）時(shí)，沒(méi)能及時(shí)貼上空白標(biāo)簽，導(dǎo)致又重新制作空白，拜拜浪費(fèi)了時(shí)間；另一次是在鑒定肌糖原酵解作用時(shí)，實(shí)驗(yàn)步驟較為繁瑣，并且老師對(duì)黑板上的簡(jiǎn)易實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行了多個(gè)補(bǔ)充，其中一點(diǎn)是要在水浴后取出大塊肉再加下一步驟的試劑，結(jié)果我們當(dāng)時(shí)產(chǎn)生了不耐煩情緒，就直接加了試劑而沒(méi)有取出大肉塊。對(duì)于這兩次情況，雖然對(duì)最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒(méi)有產(chǎn)生什么明顯的影響，但是，它實(shí)實(shí)在在體現(xiàn)了自己的操作并不是很?chē)?yán)謹(jǐn)，需要注意和努力。

在本學(xué)期生化實(shí)驗(yàn)報(bào)告的撰寫(xiě)中，我重點(diǎn)注意老師強(qiáng)調(diào)的實(shí)驗(yàn)分析部分。上課認(rèn)真聽(tīng)老師的實(shí)驗(yàn)講解并認(rèn)真記錄有關(guān)的可能實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析。在課后撰寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告時(shí)對(duì)這些點(diǎn)重點(diǎn)分析和總結(jié)，有時(shí)甚至是查找相關(guān)資料然后再進(jìn)行分析。通過(guò)這一些列的做法，我的實(shí)驗(yàn)分析能力得到了提升，我能在討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果或者實(shí)驗(yàn)操作時(shí)找到更好、更精確的切入點(diǎn)，能得出更好的結(jié)論。

同時(shí)，本學(xué)期老師將我們分為兩人一組來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，兩人之間的磨合和合作是一種鍛煉，對(duì)今后很有幫助。三、對(duì)于生化實(shí)驗(yàn)課的支持和建議

我非常感謝老師在這一學(xué)期中的辛勤勞動(dòng)。老師在課前為我們做好實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備很不容易，配試劑等都很辛苦。謝謝老師您了。

我覺(jué)得咱們的額生化實(shí)驗(yàn)課設(shè)計(jì)的挺好的。兩人一組可以分工合作，加快實(shí)驗(yàn)效率，同時(shí)又避免了因?yàn)橥�組同學(xué)人數(shù)多而有的同學(xué)無(wú)事可做的現(xiàn)象。老師在課上講解實(shí)驗(yàn)時(shí)，有關(guān)實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)可能結(jié)果、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)的分析、講解和拓展令我獲益匪淺，有利于培養(yǎng)我的實(shí)驗(yàn)思維并且拓寬了知識(shí)視野。

建議方面，我想和老師提的一點(diǎn)建議其實(shí)是有關(guān)實(shí)驗(yàn)器材方面的。對(duì)于老師所提到的有關(guān)節(jié)約試劑、減少材料浪費(fèi)等事項(xiàng)我非常贊同，并且大多數(shù)時(shí)候器材和試劑都很全（這和大一的無(wú)機(jī)實(shí)驗(yàn)和有機(jī)實(shí)驗(yàn)相比條件進(jìn)步了很多），只是希望咱們的一些其他實(shí)驗(yàn)儀器能更全面一點(diǎn)，舉一個(gè)例子，可以使用的紫外分光光度計(jì)只有3臺(tái)，有些過(guò)少，實(shí)驗(yàn)中要等待的時(shí)間較長(zhǎng)，并且有的儀器還不是很準(zhǔn)確，對(duì)于我們的實(shí)驗(yàn)造成了一定的困擾，希望老師能將實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有些問(wèn)題的儀器同一修一修。

總之，我很喜歡咱們的生化實(shí)驗(yàn)課，并且從中學(xué)到了很多知識(shí)、實(shí)驗(yàn)方法和應(yīng)用，鍛煉了實(shí)驗(yàn)操作，形成了實(shí)驗(yàn)要耐心、細(xì)心、恒心的觀念。同時(shí)還培養(yǎng)了團(tuán)隊(duì)意識(shí)和合作觀念。我獲益匪淺。

擴(kuò)展閱讀：生化試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)總結(jié)

山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

姓名王賽賽系年級(jí)組別同組者陳燕紅王梓科目生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)題目生化實(shí)驗(yàn)總結(jié)學(xué)號(hào)201*14140103

生化實(shí)驗(yàn)總結(jié)

一、實(shí)驗(yàn)感想：

本學(xué)期的十個(gè)生化實(shí)驗(yàn)，讓我們學(xué)到了不少新的實(shí)驗(yàn)技能和實(shí)驗(yàn)操

作方法及實(shí)驗(yàn)原理。

酵母RNA的提取及核酸的定量測(cè)定讓我們第一次真正的接觸到了對(duì)于核酸的一些提取、處理、及研究的方法，例如：利用RNA能溶于堿性溶液的原理來(lái)用稀堿法提取RNA，其中對(duì)于樣品的處理，以及提取完畢之后堿的中和、乙醇提取、乙醚濾干等操作方法都是以前沒(méi)遇到過(guò)的。在核酸的定量測(cè)定試驗(yàn)中，我們同樣鞏固了分光光度計(jì)的使用方法。在蛋白質(zhì)含量測(cè)定的過(guò)程中，我們學(xué)習(xí)了兩種方法，一種是folin-酚試劑法，一種是經(jīng)典的凱斯氏定氮法。前者利用folin-酚和酪氨酸和色氨酸的結(jié)合來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量，同時(shí)我們也是第一次接觸到了紫外分光光度計(jì)，以及標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)測(cè)定樣本的蛋白質(zhì)濃度。后者實(shí)驗(yàn)原理比較復(fù)雜，但總體來(lái)說(shuō)就是將蛋白質(zhì)中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化成無(wú)機(jī)氮（硫酸銨），然后再與堿液反應(yīng)，通過(guò)測(cè)量氨氣的釋放量來(lái)間接測(cè)得蛋白質(zhì)的含氮量，然后再求蛋白質(zhì)的含量。這次實(shí)驗(yàn)我們學(xué)會(huì)了使用凱氏定氮儀，并且明白了其基本工作原理。本儀器使用方便，效果良好。使用的過(guò)程中，由于要長(zhǎng)時(shí)間做大量的重復(fù)測(cè)定，由此也鍛煉了我們堅(jiān)忍不拔的實(shí)驗(yàn)精神，磨練了意志，同時(shí)也經(jīng)過(guò)反復(fù)的練習(xí)而增強(qiáng)了有關(guān)該實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)操作技能，如何緩慢山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

姓名王賽賽系年級(jí)組別同組者陳燕紅王梓科目生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)題目生化實(shí)驗(yàn)總結(jié)學(xué)號(hào)201*14140103

加液防止倒吸，如何控制蒸汽發(fā)生器防止暴沸，如何按照順序嚴(yán)格的加入試劑，以及如何進(jìn)行滴定等，通過(guò)該實(shí)驗(yàn)，對(duì)這些技能都有了進(jìn)一步的了解。在醋酸纖維素薄膜電泳的實(shí)驗(yàn)中，我們主要學(xué)習(xí)到的是在復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)材料處理的過(guò)程中如何保持清醒的頭腦，以及完整的思路，這樣才能把實(shí)驗(yàn)做好，并且做的很快。該實(shí)驗(yàn)要配制緩沖液、漂洗液、染色液、透明液，從薄膜的制作，到點(diǎn)樣，處理、電泳等要經(jīng)過(guò)一系列復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)操作，每一步都很重要，每一步的處理時(shí)間，處理程度都要靠自己去把握，最后還要經(jīng)過(guò)漂洗、冷風(fēng)吹干，最后的處理是要及其小心的，否則會(huì)把薄膜弄破，或者出現(xiàn)皺縮，不平整。如果前期點(diǎn)樣不好，或者染色、電泳過(guò)程中稍有不慎，便的不好較好的電泳條帶，出現(xiàn)拖尾，或斷續(xù)的現(xiàn)象。因此，這個(gè)實(shí)驗(yàn)尤其考驗(yàn)我們的操作能力和細(xì)心水平。酶性質(zhì)實(shí)驗(yàn)是我們接觸到為數(shù)不多的一個(gè)定性實(shí)驗(yàn)。

我們從中學(xué)會(huì)了對(duì)于定性測(cè)量的一些處理方法，例如：如何確定最佳ph？如何確定ph梯度比較合適？如何確定最佳保溫時(shí)間？這些問(wèn)題都從試實(shí)驗(yàn)中得到了解答。最后是通過(guò)顏色反應(yīng)來(lái)判斷最適宜ph，準(zhǔn)確判斷顏色深淺是一個(gè)方面，更重要的是顏色指示劑的加入量要絕對(duì)控制好，如果加的太多，則會(huì)使所有的試管顏色偏深，甚至都變成黑色，如果加的太少，那么染色就太淺，變色不明顯，所以，太深太淺都不適于顏色梯度變化的觀察。由此可知，在以后的類(lèi)似試驗(yàn)中尤其要控制指示劑的加入量，力求達(dá)到一個(gè)最佳的顏色梯度。肌糖原酵山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

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解作用實(shí)驗(yàn)中，我們不僅學(xué)到了鑒定糖酵解作用的原理和方法，還學(xué)到了在有關(guān)組織代謝實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)該注意的一些問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)將肌糖原轉(zhuǎn)變成乳酸，然后通過(guò)測(cè)定乳酸的生成量來(lái)反應(yīng)糖原的酵解。實(shí)驗(yàn)最后要經(jīng)過(guò)顏色反應(yīng)來(lái)判斷是否有乳酸生成，該反應(yīng)相當(dāng)靈敏，所以實(shí)驗(yàn)儀器要嚴(yán)格的洗干凈。記得我們這次實(shí)驗(yàn)時(shí)，第一次由于沒(méi)有洗凈試管，所以導(dǎo)致空白組也出現(xiàn)了顏色反應(yīng)，后來(lái)老師讓用濃硫酸洗過(guò)一次試管，然后才得到了正確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這是在這次試驗(yàn)中收獲最大的地方。在纖維素酶活力的測(cè)定試驗(yàn)中，第一次學(xué)習(xí)到了空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)，知道了空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)的作用，同時(shí)對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和分光光度計(jì)的使用已經(jīng)比較熟練了。薄膜層析和柱層析實(shí)驗(yàn)都是分離實(shí)驗(yàn)，兩種層析方法比較學(xué)習(xí)，對(duì)于層析又有了進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)，柱層析的實(shí)驗(yàn)中，最主要的還是層析柱的制作，和點(diǎn)樣，加樣量不要過(guò)大，過(guò)大，分離條帶過(guò)寬，如果層析柱不夠長(zhǎng)，各組分不易分開(kāi)，易同時(shí)洗脫下來(lái)（本實(shí)驗(yàn)只分離一種色素，不存在此問(wèn)題）；加樣量過(guò)少，色帶不是很清楚，不易觀察，效果不好。最后，菲林熱滴定定糖法實(shí)驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)也要做空白測(cè)定，將樣品液換成蒸餾水，正確理解空白測(cè)定的作用，然后就是熱滴定過(guò)程，該滴定不同于以往的滴定實(shí)驗(yàn)，要趁熱滴定，并且要保持滴定時(shí)間一直，防止空氣中的氧氣對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響，還有，提前加入葡萄糖的作用，是為了減少滴定過(guò)程中的加入量，縮短滴定時(shí)間，增強(qiáng)滴定準(zhǔn)確度。最后還有在滴定時(shí)候顏色的變化，通過(guò)親自的觀察對(duì)顏色的變化深有體會(huì)。山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

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通過(guò)這學(xué)期的一系列實(shí)驗(yàn)，我們學(xué)到了好多實(shí)驗(yàn)技能，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)了不少的問(wèn)題，以及理論知識(shí)的缺乏，我以后會(huì)更加努力，不斷成長(zhǎng)。

二、72型分光光度計(jì)

1、72型分光光度計(jì)原理：

72型分光光度計(jì)是可見(jiàn)光分光光度計(jì)，波長(zhǎng)范圍為420nm～700nm，它由三大部分組成:磁飽和穩(wěn)壓器、光源、單色光器和測(cè)光機(jī)構(gòu)、微電計(jì)。它的基本依據(jù)是朗伯比耳定律，它是根據(jù)相對(duì)測(cè)量原理工作的，即先選定某一溶劑作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，設(shè)定其透光率為100%，被測(cè)試樣的透光率是相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)溶液而言的，即讓單色光分別通過(guò)被測(cè)試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液，二者能量的比值就是在一定波長(zhǎng)下對(duì)于被測(cè)試樣的透光率。如圖所示，白色光源經(jīng)入射狹縫、反射鏡和透光鏡后，變成平行光進(jìn)入棱鏡，色散后的單色光經(jīng)鍍鋁的反射鏡反射后，再經(jīng)過(guò)透鏡并聚光于出射狹縫上，狹縫寬度為0.32nm。反射鏡和棱鏡組裝在一可旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)盤(pán)上并由波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器的凸輪所帶動(dòng)，轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器便可以在出光狹縫后面選擇到任一波長(zhǎng)的單色光。單色光透過(guò)樣品吸收池后由一光量調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)為適度的光通量，最后被光電電池吸收，轉(zhuǎn)換成電流后由微電計(jì)指示，從刻度標(biāo)尺上直接讀出透光率的值。2、為什么要做空白?

分光光度計(jì)測(cè)的是溶液的總體吸光度，而待測(cè)溶液中除了待測(cè)物質(zhì)外還有其他的一些雜質(zhì)等，會(huì)給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)一定的誤差，用空白組調(diào)0.可以消除由于溶液本身的吸光性質(zhì)給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的影響，確保吸光度山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

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的差異僅僅是由于溶液中待測(cè)物質(zhì)濃度的不同而引起的。3、T為什么只能用1-100的數(shù)，而不能用超過(guò)100的數(shù)？

因?yàn)樗�表示透光度，在調(diào)節(jié)100%之后最大的透過(guò)率即使空白的100，其他的只能比空白小，超過(guò)100表示光沒(méi)有透過(guò)樣本而直接穿過(guò)空當(dāng)，所以不能用超過(guò)100的。

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